王珮瑜从小学习苏州评弹。
1987年，演奏的《木兰辞》获得苏州评弹艺术节一等奖，并代表江苏、浙江、福建三省赴北京参加故事大赛。
1989年，开始接触京剧，学唱老旦。同年，在范石人的建议下改学余派。
1991年，以业余京剧爱好者身份，凭借表演《钓金龟》获得江苏省“五一杯”老旦奖。
1992年，考入上海市戏曲学校，专攻老生行当。在校期间，担任班长、学生会主席等职务。
1993年，临时顶替梅葆玥参加“京剧票友程君谋纪念演出”，与梅葆玖同台演出《文昭关》。
1994年，获得“宝钢杯”全国优秀少年京剧邀请赛专业组一等奖、“新苗杯”全国少儿京剧大赛一等奖。
1996年，获得“梨园杯”全国戏曲中专基本功大赛华东区一等奖、“蓝岛杯”海峡两岸五戏校京剧邀请赛一等奖。
1999年9月，考入上海师范大学表演艺术学院。
2001年1月10日，获得“全国京剧优秀青年演员评比展演一等奖”。
5月11日，以98.59的节目最高分，获得《CCTV全国青年京剧演员电视大赛》的“老生组最佳表演奖”。7月，进入上海京剧院工作。
2002年10月13日，凭借在京剧《问樵闹府·打棍出箱》中饰演范仲禹，获得“第13届白玉兰戏剧奖主角奖”。
2005年8月12日至13日，担任“第5届大学生戏剧节”的表演嘉宾。
2006年3月4日，参加在解放军歌剧院举办的“梨园之春——优秀青年京剧演员慈善演唱会”。
2007年9月，提名第6届中国金唱片奖“戏曲类演员奖”。
11月13日，参加在北京长安大戏院举行的“中国京剧优秀青年演员研究生班十周年汇报演出之老生经典剧目专场”，演出剧目《击鼓骂曹》。
2008年，参演陈凯歌执导的电影《梅兰芳》，为章子怡扮演的孟小冬配唱《游龙戏凤》选段。
2010年6月16日，参加梅兰芳京剧团重建15周年纪念演出，与梅葆玖等共同主演剧目《四郎探母》。
2011年6月10日，凭借亲自制作的“墨本丹青版”《赵氏孤儿》中的程婴一角，获得“第25届中国戏剧梅花奖”。
11月18日，参加在北京大学举行的“京昆明星公开课校园行”北京站活动，讲授戏曲课程。
2013年4月19日，登台“纪念张伯驹先生诞辰115周年京剧演唱会”。
5月18日，在河北大学举行由其担任主讲的莲池读书会第十四讲《古调今谈—浅谈京剧老生的演唱与表演》。
2017年2月2日，参加中央电视台戏曲频道融媒体互动戏曲节目《角儿来了》。
4月22日，连续两天在东方艺术中心表演“第十届东方名家名剧月”的参演剧目《文图会》。
2018年，当选为“上海市第十五届人民代表大会代表”。
9月24日，担任《2018年中央广播电视总台中秋晚会》表演嘉宾，演唱歌曲 《但愿人长久》。
2019年2月4日，担任《2019年中央广播电视总台春节联欢晚会》表演嘉宾，参与表演戏曲节目《锦绣梨园》。
3月30日，当选为“上海市青年联合会第十二届副主席”。
2020年1月24日，担任“2020年中央广播电视总台春节联欢晚会”表演嘉宾，参与表演戏曲节目《璀璨梨园》中的京剧《空城计》选段。
12月25日，担任中央广播电视总台国风少年创演节目《上线吧！华彩少年》的“上线官”。
2021年4月23日，凭借歌曲《少年行》获得硬地围炉夜·网易云音乐原创盛典“最佳跨界金曲奖”。
6月11日，参加的综艺节目《流淌的歌声第三季》在广东卫视播出。
9月21日，参加《2021年中央广播电视总台中秋晚会》并表演歌舞《倾国倾城》；
9月29日，王珮瑜主演8K全景声京剧电影《捉放曹》在上海首映。
2022年2月15日，参加哔哩哔哩出品的《上元千灯会》，并演唱《燕归巢》。
