1959年,与韩德三、李希达联合出演剧情电影《流水欢歌》。之后,一直在山西话剧院工作,期间多次受邀在人民大会堂主演话剧《刘胡兰》,并受到过周恩来总理的亲切接见。
1990年,与姚大石联合执导电视剧《黄河情》。2002年,与郭柯宇等联袂参演爱情剧《生死之恋》。2003年,吴彦姝退休。
从山西话剧团退休后,吴彦姝一直在家中照顾丈夫,丈夫去世后继续照顾母亲,直到2010年才被张荷儿接到北京。
2009年,由其参演的家庭情感剧《人到中年》首播。
2010年,参演由沈严、王雷联合执导的都市剧《手机》。2011年,在古装神话剧《西游记》中饰演毗蓝婆菩萨;10月18日,与赵毅、霍青联合出演的剧情电影《信义兄弟》上映,她在片中饰演孙东林的母亲。
2012年,出演根据公安系统二级英模范党育的真人真事改编创作的电视剧《营盘镇警事》,在片中饰演党育的母亲党母。
2013年,参演由沈严执导的当代都市剧《养儿防老》;8月14日,由其参演的爱情剧《失恋33天》播出。
2015年,参演由张黎执导的年代剧《少帅》;同年,与赵岩松合作主演以温州市瓯海区民警周跃南为原型的剧情电影《最美的承诺》。
2016年4月29日,参演的爱情电影《北京遇上西雅图之不二情书》上映,在片中饰演被老爷爷宠爱的唐秀懿,凭借该片入围第53届台湾电影金马奖最佳女配角奖;9月16日,参演的剧情电影《搬迁》上映,凭借该片获得第31届中国电影金鸡奖最佳女配角奖。
2017年11月3日,参演的亲情电影《相爱相亲》上映,在片中饰演为爱坚守一辈子的“乡下姥姥”,凭借该片入围第54届台湾电影金马奖最佳女配角奖、第37届香港电影金像奖最佳女配角奖。
2018年6月29日,参演的悬疑电影《动物世界》上映;8月9日,参演的悬疑剧《疯人院》播出;11月9日,参演的爱情电影《你好,之华》上映;11月22日,参演的青春爱情剧《人不彪悍枉少年》播出。
2019年,主演剧情电影《红日亭》;同年,参演剧情电影《花椒之味》。
2020年6月14日,参演的都市情感剧《高兴的酸甜苦辣》播出;11月5日,主演的电影《又见奈良》在第33届东京国际电影节展映;12月28日,参演的电视剧《流金岁月》播出。
2021年1月15日,主演的电影《没有过不去的年》上映;3月19日,主演的剧情片《又见奈良》上映;6月3日,主演的年代剧《美好的日子》在浙江卫视播出,在剧中饰演姜氏;9月19日,主演的电影《关于我妈的一切》上映;10月14日,出演的的温情电影《红尖尖》上映;11月5日,参演的电影《不老奇事》上映;12月31日,主演的电影《穿过寒冬拥抱你》在全国上映。
2022年2月1日,特别出演的电影《四海》上映;3月17日,特别出演的都市情感剧《心居》播出,在剧中饰演张老太;4月2日,特别出演的电影《你是我的春天》上映;5月5日,主演的电影《妈妈!》宣布因疫情原因延期上映(原定5月8日母亲节),新档期待定;6月24日,特别出演的青春爱情电影《一直一直都很喜欢你》上映;9月9日,主演的爱情喜剧电影《请别相信她》上映;9月10日,领衔主演的现实主义亲情电影《妈妈!》上映。